Wolf K45E Manuale Utente Scaricare il pdf (Pagina 36)

Material und Methoden

_____________________________________________________________________________________

lässt die Auswertung des SSCP lediglich die Aussage über das Vorhandensein

einer strukturellen Veränderung der untersuchten DNA zu. Ob es sich dabei um

den Austausch eines einzelnen Nukleotids (Punktmutation), den Verlust

(Deletion) bzw. das Einfügen einer Base (Insertion) oder gar den Verlust

mehrerer Basen handelt, kann erst nach der sich anschließenden

Sequenzierung der auffälligen DNA-Proben (siehe Kapitel 2.7) mit Sicherheit

gesagt werden.

Bei der SSCP-Analyse handelt es sich um eine nicht-denaturierende

Polyacrylamid-Gelelektrophorese, bei der das Laufverhalten und die

Laufgeschwindigkeit gleicher denaturierter DNA-Abschnitte in Abhängigkeit von

der Temperatur, dem pH-Wert etc. beurteilt werden. Eine Veränderung der

Nukleotidsequenz führt häufig zu einer Komformationsänderung, die einen

Mobilitätsunterschied (siehe Abbildung 2.3) bewirkt und somit das Laufverhalten

DNA-Doppelstrang

DNA-Einzelstrang

DNA-Doppelstrang

DNA-Einzelstrang

Denaturierung

Konformationsunterschied

Elektrophorese

Mobilitätsunterschied

Abbildung 2.3

SSCP – schematische Darstellung des Funktionsprinzips

1 2 ... 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 ... 130 131

Nessun commento

Wolf K45E Manuale Utente Pagina 36